猪圆环病毒2型分子免疫基础及防治技术研究
- 主要完成单位:农业科学兰州兽医研究所
- 主要完成人员:柳纪省,李宝玉,李志勇,李学瑞,娄忠子,马友记,兰 喜,杨 彬,殷相平,张 韵
- 起 止 时 间 :2008年6月—2010年6月
- 获 奖 情 况 :2011年甘肃省科技进步奖二等奖
- 内 容 提 要 :
1、对自行分离的3株PCV-2流行毒株进行了全基因组的测定、基因图谱绘制并建立了遗传进化树。
2、为了确定PCV-2核衣壳蛋白上的优势B细胞表位,分段表达了三条多肽片段,将表达的融合蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,制备并筛选出七株针对Cap蛋白的单克隆抗体。利用dot-ELISA和多肽扫描技术,于国内外首次确定了Cap蛋白122-136位的肽片段为优势B细胞表位;利用ELISPOT和ICS技术,于国内外首次从PCV-2 Cap蛋白上筛选并鉴定了三个细胞毒性T淋巴细胞表位。
3、建立了三种PCV-2的检测方法。①快速检测病原的PCR方法;②用表达的多肽片段建立了检测抗体的间接ELISA方法;③用本研究筛选的单抗建立了检测抗原的双夹心ELISA方法,该方法主要用于制苗抗原的定量检测和病原的检测。
4、试制了四种针对PCV-2的基因工程疫苗。即表达PCV-2 Cap蛋白的重组腺病毒活载体疫苗、共表达Cap蛋白和猪γ-干扰素的真核细胞双表达质粒pBud-IFN-PCV的DNA疫苗、用本研究已鉴定的四个抗原表位设计的合成肽和表位肽疫苗。对以上四种疫苗分别进行了免疫学方面的研究,动物实验表明四种疫苗均能诱导BALB/c小鼠和本动物产生较强的体液免疫和细胞免疫反应,抗体检测和细胞因子检测数据证实,表位肽疫苗的免疫效果较其它三种疫苗更好。
本研究建立的PCR诊断方法及检测抗体的间接ELISA方法和检测抗原的双夹心ELISA方法为PCV-2的流行病学调查及免疫学研究创造了条件;Cap蛋白上一个B细胞优势表位及三个CTL细胞表位的鉴定为PCV-2感染的细胞免疫机制研究奠定理论基础,也为研制针对性更强的PCV-2不同种类的基因工程疫苗提供了理论依据并奠定了良好的前期实验基础。