纯化的禽流感病毒(AIV) A/Duck/Ukraine/1/63(H3N8)经SDS-PAGE和Western-blot分析表明，有11种多肽成份可被AIV多克隆阳性血清特异性识别，占整个病毒蛋白的86.33％。用NP-40处理后作为间接酶联免疫吸附试验（间接-ELISA）抗原。以禽流感全病毒ELISA抗原和酶标兔抗鸡IgG为基础，建立了禽流感间接ELISA诊断技术。将成熟的ELISA技术和成套的试剂组装成相应的诊断试剂盒。通过试验，确定抗原的最适包被量、待检血清最适稀释度为、酶标抗体使用浓度、血清和酶标抗体的最适工作时间和底物作用时间。在此参数条件下，根据对150份SPF鸡血清检测结果的统计分析，确定间接ELISA诊断试剂盒的判定标准。用该试剂盒检测SPF鸡血清及鸡新城疫、鸡马立克氏病、鸡传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎、鸡病毒性关节炎、鸡痘、禽霍乱、鸡败血支原体感染、鸡传染性法氏囊病、鸡传染性贫血、鸡白痢、鸡白血病、鸡传染性鼻炎、鸡腺病毒感染、鸡减蛋综合征等其他15种鸡疫病阳性血清均为阴性，检测AIV 15个不同亚型(H1—H15)毒株的阳性血清均为阳性；与检测均为阴性；检出的抗体阳性能被AIV特异性中和。用该试剂盒检测禽流感阳性血清的终点滴度至少比琼脂扩散试验(AGP)高出1 000倍。对人工接种AIV的SPF鸡第3天即能检出阳性，比红细胞凝集抑制试验(HI)早2天，比AGP早7天；到第162天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在4.3％—7.1％和4.6％—9.8％之间。对3 138份鸡血清进行检测，间接ELISA与AGP、HI的符合率分别为97.1％和98.9％；并能100％检出AGP阳性及疑似、HI阳性的样品。与美国间接ELISA试剂盒对5份现地血清和7份AIV接种的SPF鸡血清检测的符合率为100%。组装成的诊断试剂盒在－20℃条件下保存540天，盒内各组份各项性能稳定，对阳性及阴性参照血清的检测结果与新制备的试剂盒没有显着差异。应用该试剂盒，不需特殊仪器设备，只需自备生理盐水，即可同时对大量血清样品进行检测，操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、稳定、快速，作为禽流感综合防制检测手段，可检测到血清中微量特异性抗体，以便及时了解并掌握禽流感的发生和感染情况，同时也能满足现地生产中禽流感免疫抗体的监测和疫病诊断等需要。