百日咳毒素SI亚单位的修饰、重组病毒表达及免疫学特性_农业科学
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百日咳毒素SI亚单位的修饰、重组病毒表达及免疫学特性

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  • 主要完成单位:中国农科院哈尔滨兽医研究所
  • 主要完成人员:于康震
  • 起  止  时  间 :1992年1月—1994年7月
  • 获  奖  情  况 :1996年农业科学科技进步奖一等奖
  • 内  容  提  要 :
  

本项目在国际上首次对晨日咳毒素SI亚单位进行了4种不同的分子修饰、继而构建了高效表达这些SI亚单位的重组痘苗病毒和杆状病毒,并对重组病毒和重组SI亚单位作了系统的理化和生物学性质的鉴定,最后对两类重组病毒的免疫原性和免疫保护性作了系统鉴定,证实它们具有开发成为新型百日咳疫苗的良好前景。
  百日咳毒素既是百日咳病的毒性因子,又是预防百日咳病的重要保护性抗原。其SI亚单位具有ADP-核糖转移酶活性和免疫保护性决定簇。在国外对SI亚单位进行遗传学脱毒研究的基础上,本研究应用了当代分子生物学技术对百日咳毒素SI亚单位作了基因修饰,重组表达及生物学和免疫学等的系统鉴定。通过研究构建了具有4种不同信号序列和嵌膜序列修饰的8个不同的SI亚单位编码基因,随后构建了能表达SI亚单位的3种重组痘苗病毒和8种重组杆状病毒,这些重组病毒SI亚单位在组织培养细胞和昆虫幼虫上可以高水平表达。对重组SI亚单位的生物学特性鉴定结果表明;天然序列的重组SI亚单位均具有酶活性,而所有变异SI亚单位则无酶活性;所有重组SI亚单位均不能与百日咳毒素B寡聚体结合而装配成全毒素。研究发现,SI亚单位结构蛋白羧墓端有2个几乎相连的疏水性区域,这是所有重组SI亚单位均为膜结合蛋白而非分泌性蛋白的原因所在。本项研究对重组病毒及重组SI亚单位的免疫学特性鉴定结果表明;SI亚单位无免疫佐剂活性。所有重组病毒和重组SI亚单位均具有良好的免疫原性,特别是对小鼠的攻毒试验证明;重组病毒和重组SI亚单位具有良好的免疫保护性,其保护率达97%(59/60)。
  该研究在分子水平上对SI亚单位进行了遗传学修饰、病毒载体表达和系统鉴定,设计新颖、方法先进、数据确实,结果可靠。查新结果表明,其对SI基因的分子修饰,痘苗病毒表达,SI亚单位分泌性和佐剂活性鉴定等,在国际上均属首次;特别是对重组SI亚单位免疫保护性的证实是国际上新型重组百日咳疫苗研制中的一项突破。

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